�j���[�����̍\���Ƌ@�\�̒��ו�

�߂�
�����̔]�_�o�n�̌����́C�u�����C����v�Ƃ����������������āC�P��j���[�����i�v�f�j���x������]�V�X�e���𗝉����悤�Ƃ�����@�_���Ƃ��Ă����D����ɍŋ߂ł́C�d�C�����w�I�v���@�ɉ����C���q��`�w�I��@�C�C���[�W���O��@�C�����č\���_�I��@�i���Ƃ��΁C�V�~�����[�V�����⃍�{�e�B�N�X�ɂ�铝���E�]����@�j�Ȃǂ��m������C�����]�̑S�j���[�����̍\���C�@�\��ԗ��I�ɕ��͂��‚C�����]�����邱�Ƃ��ł���悤�ɂȂ��Ă����D�����ł́C�����̔]���\������j���[�����̍\����@�\�̌����@�ɂ‚��ďЉ��D

���זE���v���Ɛ��F�@
���C���[�W���O
����`�q�H�w�I��@
���H�w�I��@
���זE���v���Ɛ��F�@

�܂��C�P��j���[�����̌`�Ԃ�@�\�̕��͖@����Љ��D�����] (�}�PA)�ł́C�j���[�����̍זE�̂̓N���X�^�[���`�����C�]�\�ʂɕ��z����D���������āC�]�𓪕���芮�S�ɓE�o���C�����H�����Ŗ��������X���C�h�O���X�ɌŒ肵���������C�������‘��u�ƒ��쓮�����Ε������Y(LUMPlanFl/IR, �{��40�{�C�J����0.80, �쓮����3.4 mm ����� �{��60�{�C�J����0.90, �쓮����2.0 mm)�����������������(BX51WI�COlympus)�ɐݒu���C�ߐԊO��(�g��>775 nm)�𓧉ߏƖ�����ƁC�X�̃j���[�����̍זE�̂����o�����邱�Ƃ��ł����i�}�PB,C�j�D���������āC�ߐԊO����p��CCD�J����(C2741-79�C�l���z�g�j�N�X)�Ōv���Ώۂ̍זE�̌Q���Ƃ炦�C�f�������j�^���Ȃ���C3D�}�C�N���}�j�s�����[�^�[(ONU-31P�COlympus)�𑀍삵�ăK���X�����d�Ɂi10�`100M���j��ړI�̍זE�̂Ɏh�����邱�Ƃ��ł����i�}�PB,C�j�D

�@�d�ɓ��ɂ͂��炩���ߌu���F�f�����Ă����C�ʓd�ɂ��זE���ɒ������āC�j���[��������F����D�u���F�f�Ƃ��Ă� Lucifer Yellow CH�CAlexa Flour 568���邢�́CNeurobiotin�i���̏ꍇ�CCy-3 conjugated avidin�ōR�̕W������j���g�p����D1�‚̔]�W�{�ɑ΂��ĕ����̈قȂ�j���[�����𓯎��ɐ��F���邱�Ƃ��i�}�H�j�C�܂��_�o�`�B�����̖Ɖu�g�D�w�I���F�ƕ��p�i��d���F�j���邱�Ƃɂ��C�`�B�����̌��̓�����ł�(�}�PD,E)�C�_�o��H��ǐՂ���ɂ͓s�����悢�D

�@�܂��C�d�ɂ��זE���Ɏh�����ꂽ���ǂ����́C���d�ʂ��画�f�ł���ƂƂ��ɁC���ۂɌu���F�f�𒍓�����l�q���C�u���Ɩ����u�ŗ�N���邱�Ƃɂ��m�F�ł���(�}�PB, C)�D���̂悤�Ȏ�@�ɂ��C�����]�ŏ�񏈗��Ɋ֗^���鑽���̃j���[�����̍\���Ƌ@�\�̃f�[�^�x�[�X�����s���C���̏������p���邱�Ƃɂ��C�J�C�R�K�̃t�F�������ɂ��𔭂����v���O�����s���̂����݂�]�����o�H�C����ɂ͐_�o��H�̏�񏈗��Ƃ��ĕ��͂��C�����ł���悤�ɂȂ����D
�߂�
�߂�
���C���[�W���O

�]�����͑����̃j���[�����̔��΂ɂ�萶����D�����̃j���[�����̎���ԓI�Ȋ����𓯎��ɂ݂邽�߂ɂ͂ǂ�����΂悢���D���̓����̈�‚��@�\���̌u���F�f��p�����C���[�W���O�ł���D�����͎�ɃJ�C�R�K�̚k�o�n�ꎟ�����ł����G�p�t(antennal lobe; AL)��ΏۂɁC�t�F���������܂߁C�����̎��ʂ̂����݂�T�邽�߁C�����h���ɂ�萶����G�p�t�̎���Ԋ������C���[�W���O�Z�p�ɂ��v�����Ă���(�}.�H)�D

�_�o�n�̐����@�\�v���̂��߂̃C���[�W���O�Ƃ��Ă����Ƃ����y���Ă���̂��J���V�E�����󐫌u���F�f��p�������̂ł���D����́C�j���[�������ɃJ���V�E�����󐫐F�f�𕉉ׂ��Ču�����x�ω����v��������̂ł���D���̐F�f�̓J���V�E���Ɣz�ʌ������邱�Ƃɂ��C���q�̗��̍\�����傫���ς��u�����x���ω�����D�j���[�����̑O/��V�i�v�X�����ɂ̓J���V�E���Z�x�ω����������߁C�זE���ɃJ���V�E�����󐫐F�f�����݂��Ă���΂��������ԓI�Ɋώ@���邱�Ƃ��ł���D�F�f�𒍓�������@�̈�‚�AM�@������DAM�́i�A�Z�g�L�V���`���G�X�e���́j�͖����ߐ��ł���C�זE���̃G�X�e���[�[�ɂ���čזE����AM��Ƃ�āC�{���̋@�\�𔭊�����悤�ɂȂ邽�ߍזE�O���畉�ׂł���D�������C�זE���̃J���V�E���Z�x�ω��ƃJ���V�E���u���F�f�̐����ɂ�莞�ԃX�P�[���͒x���Cin vivo�ł͂P�b���x�ł���D�����̓J�C�R�K�G�p�t�ŁC�����h���ɑ΂��鉞�����v�����Ă����i�}�H�j�D

�ŋ߂ł́C��q�̂悤�Ɉ�`�q����Z�p�ɂ�����̃j���[�������J���V�E�����󐫃^���p�N�i���Ƃ���GCaMP�j�𔭌������Čv���ł���悤�ɂȂ�C�J�C�R�K�̃t�F���������Z�v�^��GCaMP�𔭌������C���̃C���[�W���O���”\�ƂȂ��Ă���D

����C���d�ʊ��󐫐F�f�͍זE���\�ʂɌ������C�j���[���������̋����E�}���i���d�ʕω��j�ɂ��זE���̕����ω��ɂ��C�u�����x���ω�����D���̕ω����͏������C�킸����0.1%���x�ł��邪�C���d�ʂ𒼐ڂ݂���̂����݂ł���D�����́C�G�p�_�o�i�G�p�t�ւ̓��́j�̓d�C�h���ɂ�萶����G�p�t�̎���ԉ����̌v���ɐ������Ă���19)�i�}�H�j�D���̉����͐_�o�C�������̈�‚ł���Z���g�j���i5HT�j�̌��ʂɂ�葝�債�C�J�C�R�K�̃t�F�����������̊��x�����������ōs���邱�Ƃ����̌������疾�炩�ɂȂ��Ă���19)�i�}�H�j.
�}�P�D�J�C�R�K�̔]�Ɣ]���\������P��_�o�זE�D(A) �J�C�R�K�̔]�̐��ʑ��D(B, C) �������‘��u������������������ɂ��C�iA)�̔]���ߐԊO��(�g��>775 nm)�ɂ�蓧�ߏƖ�����ƁC�X�̃j���[�����̍זE�̂����o�����邱�Ƃ��ł���D3D�}�C�N���}�j�s�����[�^�[�𑀍삵�ăK���X�����d�ɂ�ړI�̐_�o�זE�̍זE�́i��j�Ɏh�����C�d�ɓ��̌u���F�f�𒍓����Đ��F����D�iD) ���F�����P��̐_�o�זE�D�iE) �iD)�̔]�W�{�ɑ΂��Đ_�o�`�B�����̖Ɖu�g�D�w�I���F�𕹗p�i��d���F�j���邱�Ƃɂ��C�`�B�����̌�����肷��D�����ł́C�}�����̐_�o�`�B�����ł���GABA�Ɖu�g�D���F�𓯎��ɍs�����Ƃɂ���āC�iD)�̐_�o�זE��GABA�}�����_�o�ł��邱�Ƃ��킩��DGABA�}�����_�o�͐ԐF�Ɍu���W�������D�X�P�[���F1mm�iA)�C100um�iB-E)�D
���H�w�I��@

���{�b�g�͐l�H���ł��邪�䂦�ɁC�l�Ԃ̐݌v�⑀��Ɋ�Â��āC���‹��Œ����ɓ��삷��D���̓����́C�\�z�����_�o��H���f���̓�������؂����Ŕ��ɗL�p�ł���D����ɁC�����ƃ��{�b�g�����т‚��C�s�������𑀍삷�邱�ƂŁC�����̐V���ȋ@�\���݂邱�Ƃ��”\�ł���D���ݍs���Ă���C�����s���̌����ɂ����郍�{�b�g�̊��p����R�Љ��D�ڍׂ͈ȉ����Q�Ƃ̂��ƁD

�E �]���f���Ő��䂷�郍�{�b�g

�E �J�C�R�K�����c���郍�{�b�g

�E �J�C�R�K�̔]�M���ɂ�萧�䂷�郍�{�b�g
�߂�
�߂�
�߂�
����`�q�H�w�I��@

�ߔN�̑�K�͂�DNA�z�񌈒�Z�p�̐i�W�ɂƂ��Ȃ��C�����̈�`���ł���Q�m���z�񂪑����̎�Ō��肳��Ă���D�J�C�R�K�ɂ����Ă��Q�m���v���W�F�N�g���قڊ������C��`�q�z�񂪖ԗ��I�ɖ��炩�ɂ���Ă���10),11)�D���̂悤�Ȉ�`�q���Ɋ�Â��āC�זE���Ž�������Z�p�Ƃ��đg�D����mRNA�����o����in situ hybridization�@�C�^���p�N�������o�����Ɖu�g�D���w�I��@�C�������g�����X�W�F�j�b�N�Z�p����`�q�v�����[�^�[�𗘗p�������q��`�w�I��@����������D

�O��2�‚̎�@���g�D�̌Œ��K�v�Ƃ��u���񂾁v�����ł����K�p�ł��Ȃ��̂ɑ΂��C���q��`�w�I��@�́u�������v�����̍זE��in vivo�ʼnŽ����ł���Ƃ����傫�ȗ��_������D����ɁC���̎�@�͒P�Ƀj���[�����̉Ž����ɂƂǂ܂炸�C�_�o�`�B�̑j�Q�ɂ�����̐_�o��H�̋@�\��͂�@�\��`�q�̓����ɂ��j���[�����̋@�\���ς�in vivo�ōs�����Ƃ��”\�ɂ��C��`�q����s�����u�݂�v���߂ɕK�v�s�Œ��ȋZ�p�ƂȂ��Ă���D

���̂悤�ȕ��q��`�w�I��@�ɂ��]�_�o�n�̉�͂͂���܂ň�`�q����Z�p�̔��B�����L�C���V���E�W���E�o�G�iDrosophila melanogaster�j�̓ƒd��ł��������C2000�N�ɓc����ɂ��C�J�C�R�K�Ńg�����X�W�F�j�b�N�̂̍�o�@���m������12)�C�J�C�R�K�]�_�o�n�̌����ɕ��q�����w�I��@�𓱓����邱�Ƃ��ł���悤�ɂȂ����D�����ł͂���ꂪ�i�߂Ă���J�C�R�K�]�_�o�n�ւ̕��q��`�w�I��@�̓K�p�ɂ‚��ďЉ��D

�J�C�R�K�ł́C�g�����X�|�]���̈��ł���piggyBac�𗘗p�����g�����X�W�F�j�b�N�̂̍�o�@���m������Ă���12)�D�g�����X�W�F�j�b�N�̂œ���̃j���[�����ŊO����`�q�𔭌������邽�߂ɂ́C�^�[�Q�b�g�Ƃ���זE�Ŕ������邱�Ƃ��m���Ă����`�q�̃v�����[�^�[�̈�𗘗p�����iFig. 7A�j�D�j���[�������Ž������邽�߂̃��|�[�^�[��`�q�Ƃ��Ă͐��F�̑���̕K�v���Ȃ��C��������������ԂŌ��o�ł����ΐF�u���^���p�N���iGFP�j�C�ԐF�u���^���p�N���iDsRed�j�Ȃǂ̌u���^���p�N������Ɏg�p�����D�}�H�ɐl�H�v�����[�^�[�ł���3xP3�v�����[�^�[��p���āC�J�C�R��Ɨc���̒P��̊��o�j���[������DsRed�ʼnŽ�����������������D�����̃��|�[�^�[��`�q�͔�r�I�ψ�ɍזE���ɕ��z���邽�߁C���������j���[�����S�̂̌`�Ԃ��Ž������邱�Ƃ��ł���D





Fig. 7 Schematic diagram of reporter gene expression systems in transgenic silkmoths. (A) In the promoter-reporter system, promoter sequence is placed immediately upstream of reporter gene and directly activates reporter gene expression. (B) In the GAL4-UAS system, reporter gene expression is activated via GAL4-UAS yeast transcriptional system.



����ŁC�V���E�W���E�o�G�ł͍זE���Ǎ݃V�O�i���z���t�������u���^���p�N����p���邱�ƂŁC�V�i�v�X���[�Ȃǃj���[�����̓���̗̈�̉Ž������Ȃ���Ă���C�J�C�R�K�ł����̂悤�ȃ��|�[�^�[�n���̍�o���҂����D�܂��C���|�[�^�[��`�q�ɃJ���V�E�����󐫌u���^���p�N��G-CaMP��p���邱�ƂŐ_�o�����̃C���[�W���O���s�����Ƃ��ł���D�����g�����X�W�F�j�b�N�n�����̌‘͈̂�`�I�ɋψ�ł��邽�߁C��x�g�����X�W�F�j�b�N�n������o����΁C�قȂ�‘̂œ����זE��W�����邱�Ƃ��ł���D

�v�����[�^�[�ɂ�铱����`�q�������߂̔��W�^�Ƃ����y��R���]�ʈ��qGAL4�Ƃ��̕W�I�z��ł���UAS�𗘗p����GAL4-UAS�V�X�e�����V���E�W���E�o�G�𒆐S�ɍL�͂Ɏg���Ă���D���̃V�X�e���ł́C�v�����[�^�[����GAL4��`�q�z����‚Ȃ����g������`�q�����Œn����UAS���Ƀ��|�[�^�[��`�q���‚Ȃ����g�݊�����`�q�����Œn����ʌ‚ɍ�o����D���҂���z���ē���ꂽ������‘̂ł�GAL4��UAS�Ɍ������C���|�[�^�[��`�q����������(Fig. 7B)�DGAL4-UAS�V�X�e���̗��_�Ƃ��āC�����זE�̓��ِ������肷��GAL4�n���ƁC���|�[�^�[��`�q�𔭌�����UAS�n�����ʂ̌n���Ƃ��ĕ�������Ă��邱�Ƃ���������D���Ȃ킿�CUAS�����ɈقȂ��`�q���‚Ȃ����n������z�ɗp���邱�ƂŁC�P��̌�z�����ɂ��ȕւɂ��܂��܂ȃ��|�[�^�[��`�q��G�t�F�N�^�[��`�q�𓯂��זE�ōČ��I�ɔ����ł���D

�J�C�R�K�ɂ����Ă�2003�N�ɍ�����ɂ��CGAL4-UAS�V�X�e�����̑g�D�Ő���ɋ@�\���邱�Ƃ��񍐂��ꂽ13)�D�����ł����͂܂��CGAL4-UAS�V�X�e�����]�_�o�n�Ő������@�\���邱�Ƃ����؂��邽�߂ɁC�Q��ނ̐_�o�y�v�`�h�z�������̃v�����[�^�[�z��̉�����GAL4�����ƒg�����X�W�F�j�b�N�n�������ꂼ���o�����D�����̌n����UAS-GFP�n���̌�z�œ���ꂽ������‘̂ł͐_�o�y�v�`�h����זE�œ��ٓI��GFP�u�����ώ@���ꂽ�i�R�`��C���e���j�D���̌��ʂ́C��`�q�v�����[�^�[�𗘗p���ăJ�C�R�K�]�̓���̃j���[�������Ž������邽�߂�GAL4-UAS�V�X�e�����L�p�ł��邱�Ƃ������Ă���D

�����ŁC���̃V�X�e���𗘗p���ăt�F���������̐G�p����]�ւ̋�ԓI�ȏ����̓p�^�[���𒲂ׂ邽�߂ɁC�t�F�������听���ł����{���r�R�[���̎�e�̈�`�qBmOR114)�ƕ������ł����{���r�J�[���̎�e�̈�`�qBmOR315)�̃v�����[�^�[�̈扺��GAL4�𔭌�����n������o�����D����܂łɁC�����̌n����UAS-GFP�n���̌�z�œ���ꂽ������‘̂̉�͂���C�G�p�Ŏ�e���ꂽ�{���r�R�[���ƃ{���r�J�[���̏�񂪁C�k�o�n�ꎟ�����ł���G�p�t�̈قȂ�̈�ɓ`�B����邱�Ƃ����o���Ă���i�N���C�����\�j�D����ɁC������GAL4�n����UAS-GCaMP�n���ƌ�z���C�G�p���t�F�������Ŏh�������Ƃ��̐G�p�t�̃J���V�E���C���[�W���O�ɐ������Ă���D

���̂悤�ɁC�J�C�R�K�̃t�F��������񏈗��Ɋ֗^����j���[�����Q�̍\���Ƌ@�\�̗����ɕ��q��`�w�I��@�����p�ł���悤�ɂȂ��Ă����D����̉ۑ�Ƃ��āC�őf��`�q�Ȃǂ̍זE����_�o�`�B��j�Q�����`�q�𔭌�����UAS�n������o���邱�Ƃ���������D����ɂ��C�Ž��������j���[�����̋@�\��j�Q���C����̐_�o��H���t�F����������ʍs���ɉʂ����������‘̃��x���Œm�邱�Ƃ��ł���D����ɂ́C�Ž��������j���[�����ɋ@�\��`�q�𓱓����C�ϋɓI�Ƀj���[�����̋@�\�����ς��邱�Ƃ��”\�ɂȂ邾�낤�D���Ƃ��΁C�C�I���`���l����_�o�`�B������e�̈�`�q�̓����ɂ��j���[�����̓�������`�q���x���ʼn��ς��邱�ƂŁC�t�F����������ʍs���̊�ɂ���_�o��H�̋@�\�����ς��C�s����l�דI�Ƀf�U�C�����邱�Ƃ��ł���悤�ɂȂ邩������Ȃ��D